產品名稱：293A人胚腎細胞（傳代）?   

細胞規格：1-3×10^6細胞量

庫存狀態：現貨

培養液：DMEM+10% FBS

運輸方式：常溫順豐運輸和干冰順豐運輸

貨 期：復蘇細胞需要1-2周，凍存細胞的需要3-5天（特殊情況會有說明）

質 控：無支原體、無污染、符合標準

研究范圍：僅供科研使用

293A人胚腎細胞（傳代）?  

品 牌： NTC胎牛血清、Sigma 胎牛血清、PAA 胎牛血清

貨 號：SFBE、F2442、A15-151

規 格： 500ml

溫馨提示：本產品僅限于非臨床科研用途。

運輸保存及注意點：

1.干冰全程運輸，保證您的使用！

2.-20℃，避光恒溫冰箱，避免反復凍融！

  我司主營產品是國內傳代細胞和細胞培養相關的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質血清。常規液體培養基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產品、ELISA 試劑盒、Sigma現貨試劑等產品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購！

    MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株、HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株、LOVO/5-FU 人結腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株、HCT116/L人結腸癌奧沙利鉑耐藥細胞、HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株、PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼、LOVO/ADR人結腸癌細胞阿霉素耐藥株、HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株、SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株、A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株、MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株、A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株、SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株、SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株、HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株。

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PK-15 豬腎細胞、Duckembyro 鴨胚胎成纖維細胞、vero 綠猴腎細胞、Hep3B人肝癌細胞、HPAC人胰腺癌細胞、HT-1376 人膀胱癌細胞、JAR 人胎盤絨毛癌細胞、KNS-89 人腦膠質細胞瘤細胞。

將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培 養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。

操作步驟
（一）胰酶消化法
1、器材：將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死，置75%酒精泡2—3秒鐘（時間不能過長、以免酒精從口和肛門浸入體內）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠帶 入超凈臺內（或將新生小鼠在超凈臺內）解剖取肝臟，置平皿中。
2、用Hank’s液洗滌三次，并剔除脂肪，結締組織，血液等雜物。
3、用手術剪將肝臟剪成小塊（1mm2），再用Hank’s液洗三次，轉移至小青霉素瓶中。
4、視組織塊量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
5、加入3—5ml培養液以終止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制劑）。
6、靜置5—10分鐘，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。
7、1000rpm，離心10分鐘，棄上清液。
8、加入Hank’s液5ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
9、加入培養液l—2 ml（視細胞量），血球計數板計數。
10、將細胞調整到5×105/ml左右，轉移至25ml細胞培養瓶中，37℃下培養。 上述消化分離的方法是zui基本的方法，在該方法的基礎上，可進一步分離不同細胞。細胞分離的方法各實驗室不同，所采用的消化酶也不相同（如 膠原酶，透明質酶等）。
Hyclone胎牛血清SH30084.03  、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03  、Hyclone胎牛血清SH30070.03

特級胎牛血清 SH30070.03E 、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03  、活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI 、

馬血清SH30074.03  、烏拉圭胎牛血清SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 、PAA 優等胎牛血清FBS A15-151。

BI優等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級別胎牛血清 04-002-1A 、BI 間充質胎牛血清 04-400-1A 。

Corning胎牛血清 35-076-CV。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P ；

NTC優等胎牛血清 SFBE、TCB胎牛血清 101ZC。

Gemini優等胎牛血清 900-108 、Gemini特級胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。 

Sigma 特級胎牛血清F2442 、Sigma正常人AB血清 H4522 。

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1。

GIBCO胎牛血清盒裝A31608-02、GIBCO馬血清16050-122、GIBCO 胎牛血清10270-106、雙抗15140-122、SV30010  、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。

（二）組織塊直接培養法。自上方法第3步后，將組織塊轉移到培養瓶，貼附與瓶底面。翻轉瓶底朝上，將培養液加至瓶中，培養液勿接觸組織塊。入37℃靜置3—5小時，輕 輕翻轉培養瓶，使組織浸入培養液中（勿使組織漂起），37℃繼續培養。

雙抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培養基 C11995500BT

DMEM低糖培養基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培養基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培養基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS緩沖液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02

31232-250G C1184 76524-100MG 334065-50G R2625 650471-1L‍

203521-100G 75688 V900830-5G 262072-25G T7505 V900852-25G

379816-1G 193992 43820-10G C4151-5G T1503 D0550-100G

71643-250G B8026 52976-1MG-F 30435-500G C3389 P3803-100ml

I1406-250MG C3667 A7906 R3875-10MG B5887 82524-1KG‍

398853-5G C8356 T46108-100G 61197-250G H4272 P1609000

M7634-100G D8418 158534-10G V900271-500G D2629 383112-100G

63138-250G S5631 T2036-100MG M1880-500G C7698 14400-100MG

223506-25G A2058 A7085-100G 223506-500G P3932 K1512-500G

C7902-500G 219703 15972-5ML-F C5080-500G R7632 72609-100MG

21097-250G 12072 S3132-100MG 12022-1KG G3632 C2932-5MG

105937-5G S4641 R0901-100ML 459097-5G G9268 119660-25G

A6014-10G C9752 209465-25G B4554-25G T0303 R8004-5MG

258024-5G M4125 32417-500MG T3251-25G S5390 S8875-500G

B6149-25MG T2885 04269-1KG 11569-25MG C7902 206075-1G

71162-25G 230251 205796-2G N1376-25G A9434 E9508-100ML

G0639-5G-9 P1379 21479-1ML 381071-25G S5761 G25150-50G

B0750-500G M3516 17843-250G 73677-250MG S7795 A4106-25G

L2884-10MG C6905 65969-10MG L2884-5MG C6288 T9250-5G 

C2885-25G C0406 S9251-100g L8533-250MG S5761 P9380-5G

62613-250G P9155 13180-100ML 518018-10G L2880 A88182-100G

09830-500G A2427 21719-5ML-F 324817-250MG D5879 202185-25G

原代動物細胞培養：

1、實驗材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存，并盡快進行細胞分離實驗。

2、無菌操作。操作時用的培養液，可加平時細胞培養液5倍含量的青鏈霉素。

3、用酶法分離細胞時，注意酶液的濃度和控制消化時間。

貼塊法分離細胞時，注意動作要輕柔，不要傷到細胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利于細胞游離。

4、培養液的選擇。不同的細胞有對培養液中營養的要求不同，根據所分離細胞的特性選擇。

傳代細胞培養：

1、無菌操作

2、控制消化時間

3、及時關注細胞生長狀態

神經細胞的原代培養是盡 量 創造于各類神經細胞生長的體外環境，獲得狀態良好，純度較高細胞的方法 。 腦部組織來源的各種神經細胞的培養具有相似的取材過程和部分通用的培養條件。

除動物消毒以外，其他步驟都在超凈臺內進行 。

1. 動物的消毒：根據培養細胞的類型和要求不同，常用胎鼠和新生鼠做神經細胞的培養。消毒方法分別如下 。

(1) 孕鼠操作 孕鼠經wu 巴 bi妥na麻醉后，以棉球蘸碘伏擦拭腹部毛皮消毒 。 擦拭從中心向外方向進行，可更換棉球 1- 2次，面積盡量大一些，包括整個腹部和外生殖器周圍 。 用第 1 套解剖器械打開動物腹腔，換第 2 套器械分離子宮并置于含冷 D ­PBS 的 100mm 玻璃皿中，再換第 3 套器械在每只胎鼠的間隔處剪開子宮并剝離出胎鼠 。

(2) 仔鼠操作 仔鼠（新生 7d 以內）直接浸泡于冰的 75%酒精中， -20℃冰箱低溫消毒 10min 左右，動物失去知覺即可開始取材 。

2. 皮層組織的分離：新生鼠使用眼科剪將動物斷頭，并用鑷子剝除頭部的皮膚 。在冰 D -PBS 液中沿顱骨人字縫從后向前剝離 。 一般左手持彎鑷，在動物兩眼處以適當力度固定；右手持直鑷，完成剝除皮膚 、 骨骼以及分離組織等工作 。 在顯微鏡下利用精細器械分離皮層或海馬時，沿皮層邊緣以 45° 角小心劃開，并逐步使之剝離，轉移組織入盛有冰 D - PBS 液的 35mm 小皿中；然后用精細器械仔細去除每個皮層或海馬的腦膜（整個過程需要在低溫冰袋上完成） 。

3.組織的分散；用管口較粗的彎頭滴管吸去帶有腦膜的 D - PBS, 盡zui去除干凈液體并避免吸走組織；用虹膜剪將組織逐撮均勻剪成乳糜狀，使組織塊為 lmm3 的大小為宜 。 加入合適體積的消化液（－般蓋過組織塊并且可以隨意搖晃即可），并均勻分散組織，放入37°C 孵育箱中消化約 15min (每間隔 3 -5min 用手輕輕搖晃1次，動物胎齡越小，越容易分散，消化時間可相應縮短） 。

4. 單細胞懸液的制備!用口徑較粗的彎頭滴管將消化好的組織吸入含 3 - 5ml 冰的*培養基的 10ml 離心管中，靜置 5min 左右 。 用同樣的滴管將沉底的組織轉移到另 一個含約 5ml 冰的*培養基的 10ml 離心管中，并開始吹打 。 吹打時每次不超過 15 次，先用粗口徑的彎頭滴管吹散，靜置片刻后將上清用細口徑彎頭滴管轉移至另 一個離心管中，并再吹打 15 次左右 。 在原先含沉淀的離心管中再加入*培養基繼續吹打，并收集上清重復上述過程 。 反復吹打幾次后，組織塊基本消失，將全部上清過 200 目篩網以去除剩余組織塊并收集、計數 。 離心 (900r/min, 5min) 去除細胞碎片并將細胞重懸至合適的體積，以備后用 。

1.在做原代之前準備工作一定要做好，提前配好液體。整個操作過程注意無菌，且培養液中如無特殊說明，均含有青－鏈霉素（雙抗）。

2.動物消毒應在遠離超凈工作臺的區域完成，成年動物尤其要注意。

3.組織取材過程全部在低溫環境中進行，可大大提高細胞存活；而且整個過程不宜太久，否則細胞活性明顯降低。

4.在組織分散過程中，一般3只左右動物來源的皮層在一個小皿中剪碎消化，不宜在同一個小皿中處理過多的組織。

5.吹打細胞用的彎頭滴管一定要事先經火焰拋光，否則細胞極易受傷而死亡；而且吹打細胞懸液時盡量避免產生過多氣泡，可以提高細胞的存活。

6.基本上原代培養的各種神經細胞都需要生長在經特殊物質處理過的培養介質上，比如多聚賴氨酸、層黏連蛋白等。

1.大鼠和小鼠來源的神經細胞培養方法大致上相同，除特殊提到以外，基本可以通用。

2.去除腦膜時，一般左手持懾輕柔固定組織，右手負責剝離。整塊腦膜一同被剝離后，往往細胞培養物中的成纖維細胞污染較少。

3.胰酶消化液處理后的組織往往發黏，這是細胞釋放出DNA的原因。這并不會影響消化效果，而且可以在后面的吹打過程中去除。對于初學者，可以通過在消化液中加入DNA酶的方法提高zui終細胞的產量。

4.在胰酶消化液中加入EDTA有利于組織細胞團分散成單細胞，終止EDTA的作用主要依靠稀釋以降低其濃度。