產(chǎn)品名稱：人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細胞熒光素酶標(biāo)記    

細胞代碼：U251MG/TMZ+LUC(3000)

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS +1%P/S +TMZ

生長狀態(tài)：貼壁生長

03、細胞培養(yǎng)時能否更換胎牛血清?

首先要確定更換胎牛血清的理由，如果細胞培養(yǎng)無異常的話，不建議隨意更換不同品牌和來源的胎牛血清。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的來源(血源地)和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同地域和等級的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞死亡。

如果是使用的胎牛血清出現(xiàn)了問題，比如保存不當(dāng)或操作不當(dāng)導(dǎo)致血清成分析出、混濁、污染等情況，可以優(yōu)先更換同品牌、等級、批次的血清;如果是產(chǎn)品質(zhì)量問題更換血清品牌的話，需要用一批細胞進行預(yù)實驗才行，以保證細胞能夠正常培養(yǎng)。

另外在購買胎牛血清的時候要選擇正規(guī)來源和經(jīng)過海關(guān)檢疫胎牛血清，非正規(guī)來源的胎牛血清有很多安全隱患，對實驗室、操作人員、細胞培養(yǎng)、實驗數(shù)據(jù)都有很大的影響。

04、一般在拿到細胞后，應(yīng)該注意什么?

收到細胞后先不要開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議對收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張)，排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況一般可以再申請免費發(fā)送一株細胞。

收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

細胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制。

05、培養(yǎng)細胞什么時候需要換液?

視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。

06、培養(yǎng)基到底要不要加抗生素?

除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。如果是沒有進行過細胞培養(yǎng)的新手，對無菌技術(shù)沒有信心的，或者提取的原代細胞，怕污染的，可以適量添加抗生素。抗生素本身也是有毒性的，有些抗生素的藥效濃度水平與毒效濃度水平非常接近，對細胞多少有傷害。

07、培養(yǎng)箱二氧化碳使用比例如何判定?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應(yīng)使用5CO2培養(yǎng)細胞。

小鼠肝實質(zhì)細胞 AML-12

小鼠氣道平滑肌細胞 ASMC

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞 G422

小鼠精原細胞系 GC-1 spg

小鼠主動脈內(nèi)皮細胞 MAEC

小鼠骨樣細胞 MLO-Y4

小鼠肺上皮細胞 MLE-12

小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細胞 IMCD3

小鼠胚胎成纖維細胞 3T3-L1

小鼠乳腺癌細胞 4T1

小鼠乳腺癌細胞熒光素酶標(biāo)記 4T1+luc

小鼠巨噬細胞 Ana-1

小鼠黑色素瘤細胞 B16

小鼠黑色素瘤細胞 B16-F10

小鼠黑色素瘤細胞熒光素酶標(biāo)記 B16-F10+LUC

小鼠原B細胞株 BAF3

小鼠胚胎成纖維細胞 BALB/3T3 clone A31

小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株 bEnd.3

小鼠胰島素瘤胰島Beta細胞 Beta-TC-6

小鼠小膠質(zhì)細胞 BV2

小鼠神經(jīng)干細胞 C17.2

小鼠成肌細胞 C2C12

小鼠胚胎成纖維細胞 C3H/10T1/2 Clone8  

小鼠結(jié)腸癌細胞 CT26

小鼠結(jié)腸癌細胞熒光素酶標(biāo)記 CT26+LUC

小鼠結(jié)腸癌細胞 CT26.WT

小鼠胚胎干細胞 E14

小鼠淋巴瘤細胞 EL-4

小鼠乳腺癌細胞 EMT6

小鼠膠質(zhì)細胞瘤 GL-261

小鼠膠質(zhì)細胞瘤熒光素酶標(biāo)記 GL-261+luc

小鼠乳腺上皮細胞 HC11

小鼠肝癌細胞 HEPA1-6

小鼠肝癌細胞熒光素酶標(biāo)記 HEPA1-6+LUC

小鼠海馬神經(jīng)元細胞 HT22

小鼠卵巢上皮癌細胞 ID8

小鼠單核巨噬細胞 J774A.1

小鼠骨肉瘤成骨細胞 K7M2WT (K7M2-wt)

小鼠骨肉瘤成骨細胞熒光素酶標(biāo)記 K7M2WT(K7M2-WT)-LUC

小鼠肺癌細胞 LLC

小鼠肺癌細胞熒光素酶標(biāo)記 LLC+LUC

小鼠淋巴瘤細胞 L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)

小鼠成纖維細胞 L929

小鼠胰腺癌細胞 LTPA

小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞 MA-891

小鼠膀胱癌細胞 MB49

小鼠結(jié)腸癌細胞 MC38

小鼠結(jié)腸癌細胞熒光素酶標(biāo)記 MC38+LUC

小鼠胚胎成骨細胞 MC3T3-E1

小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14 MC3T3-E1subclone 14

小鼠胚胎成纖維細胞 MEF

小鼠胚胎成纖維細胞 MEF(霉素C處理)

小鼠前胃癌細胞 MFC

小鼠正常肝細胞 NCTC1469（NCTC CLONE 1469）

小鼠腦神經(jīng)瘤細胞 neuro-2a

小鼠胚胎細胞 NIH/3T3

小鼠骨髓基質(zhì)細胞 OP9

小鼠雜交瘤（抗CD2）細胞 OKT11

小鼠畸胎瘤細胞 P19

小鼠白血病細胞 P388

小鼠肥大細胞瘤細胞 P815

小鼠源基于MLV-10A1逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細胞系 PT-67

小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 RAW 264.7

小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞 RGC-5

小鼠前列腺癌細胞 RM-1

小鼠雜交瘤 SDOW-17

小鼠骨髓瘤細胞 Sp2/0

小鼠骨髓瘤細胞 Sp2/0-Ag14

小鼠小腸內(nèi)分泌細胞 STC-1

小鼠腎小球系膜細胞 SV40-MES-13

小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細胞 SVEC4-10

小鼠睪丸間質(zhì)細胞 TM3

08、L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎?

L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。

09、培養(yǎng)基里的粉紅色是什么?

酚紅一般作為培養(yǎng)基中pH值的指標(biāo)：當(dāng)培養(yǎng)基呈中性時為紅色，呈酸性時為黃色，堿性時為紫色。另外，酚紅可以模擬類固醇激素(特別是雌激素)的作用。如果要避免類固醇反應(yīng)，可以在無酚紅的培養(yǎng)基里進行培養(yǎng)。

10、胰酶里EDTA的作用?

二價的離子會抑制胰酶活性，所以加入EDTA可以螯合掉Ca、Mg這樣的二價離子。胰酶也要注意不要反復(fù)凍融。

11、如何避免細胞培養(yǎng)過程中的污染?

主要還是考慮無菌環(huán)境，盡量做好操作臺的滅菌，別把培養(yǎng)基滴落在生物安全柜的入風(fēng)口，別在培養(yǎng)箱里把培養(yǎng)基打翻。這兩個地方霉菌一旦滋生，那你就只能等著用甲醛熏蒸了。

紫外無法殺滅霉菌，酒精也不行，只能用甲醛熏蒸，但是一定要注意安全。復(fù)蘇的時候，水浴鍋也需要進行滅菌處理。一旦出現(xiàn)污染，不要急，能救的就用抗生素救一下，但是一般情況下，選擇扔掉。避免交叉感染，要不只能整個實驗室消毒了。

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